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Mouse BDNF ELISA Kit 小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子ELISA試劑盒

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詳細(xì)介紹

 

腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)是1982年Barde等首先在豬腦中發(fā)現(xiàn)的一種具有神經(jīng)營養(yǎng)作用的蛋白質(zhì),屬于NGF家族神經(jīng)營養(yǎng)因子的成員,是中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中特定神經(jīng)元亞群分化和存活所必需的。神經(jīng)營養(yǎng)蛋白家族由至少四種蛋白質(zhì)組成,包括NGF,BDNF,NT-3和NT-4/5。這些分泌的細(xì)胞因子被合成為前前肽,其被蛋白水解處理以產(chǎn)生成熟的蛋白質(zhì)。所有神經(jīng)營養(yǎng)因子都有六個(gè)保守的半胱氨酸殘基,它們參與三個(gè)二硫鍵的形成,并且在氨基酸水平上都共享約55%的序列同源性。與NGF類似,生物活性BDNF被預(yù)測為非共價(jià)連接的同源二聚體。BDNF可以與低親和力細(xì)胞表面受體LNGFR結(jié)合,該受體也結(jié)合其他神經(jīng)營養(yǎng)因子,如NGF,NT-3和NT-4。然而,BDNF通過高親和力細(xì)胞表面受體gp145/trkB發(fā)出信號來介導(dǎo)其神經(jīng)營養(yǎng)特性。

翌圣Mouse BDNF ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒,用于定量測定血清、血漿中的小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Mouse BDNF)。特異性抗小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本,經(jīng)過孵育,樣本中存在的小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后,加入檢測抗體孵育結(jié)合,經(jīng)洗滌,再加入酶結(jié)合物(Streptavidin-HRP)孵育結(jié)合。洗滌后,加入顯色底物 TMB,避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng),在450 nm 波長(參考波長570 - 630 nm)測定吸光度值。

 

產(chǎn)品信息

貨號

98030ES48 / 98030ES96 

規(guī)格

48 T / 96 T

檢測范圍

31.25-2000 pg/mL

檢測方法

雙抗夾心法

檢測物種

小鼠

檢測時(shí)長

4.5小時(shí)

靈敏度

9.7 pg/mL

稀釋線性

79 - 123%

回收率

83 - 110%

板內(nèi)差

3.2%

板間差

8.2%

 

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

  1. 標(biāo)曲數(shù)據(jù)

數(shù)據(jù)擬合繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,生成的標(biāo)曲用于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析

  1. 靈敏度檢測

BDNF的最低檢測限為9.7 pg/mL,通過使用重復(fù)檢測20次零孔OD值的均值與標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算得出。

  1. 精密度檢測

酶標(biāo)板內(nèi)精密度

3個(gè)已知濃度的樣本酶標(biāo)板內(nèi)重復(fù)測定8次,評估酶標(biāo)板內(nèi)的精密度。

酶標(biāo)板間精密度

3個(gè)已知濃度的樣本酶標(biāo)板間重復(fù)檢測24次,評估酶標(biāo)板間的精密度。

項(xiàng)目

板內(nèi)精密度

板間精密度

樣本

1

2

3

1

2

3

8

8

8

24

24

24

平均值

830.6

268.3

76.0

805.3

250.4

77.4

標(biāo)準(zhǔn)差

21.1

10.1

2.6

60.8

19.5

7.0

變異系數(shù)%

2.5

3.8

3.4

7.6

7.8

9.1

  1. 回收率檢測

 通過不同水平的BDNF添加于樣本中來測定回收率,其回收率如下:

樣本類型

平均回收率(%)

范圍(%)

血清

89.9

83.5-94.9

血漿

94.9

86.2-110.2

細(xì)胞培養(yǎng)上清

91.2

83.4-100.0

  1. 稀釋線性檢測

血清稀釋比例

平均期望值(%)

范圍(%)

1:02

108.8

103.4-116.8

1:04

118.7

116.5-123.1

1:08

110.5

106.8-115.4

1:16

100.6

90.7-106.8

 

血漿稀釋比例

平均期望值(%)

范圍(%)

1:02

108.8

103.4-116.8

1:04

118.7

116.5-123.1

1:08

110.5

106.8-115.4

1:16

100.6

90.7-106.8

 

細(xì)胞培養(yǎng)上清稀釋比例

平均期望值(%)

范圍(%)

1:02

95.7

87.2-106.3

1:04

101.4

86.1-111.6

1:08

109.5

94.1-122.1

1:16

100.3

78.6-114.2

  1. 樣本值

應(yīng)用本試劑盒,檢測若干健康志愿者的樣本,志愿者的用藥史不詳。

樣本類型

樣本數(shù)目

平均值(pg/mL)

樣本值(pg/mL)

血清

8

n.d.

n.d.

血漿

8

n.d.

n.d.

細(xì)胞培養(yǎng)上清

4

n.d.

n.d.

n.d. 指樣本濃度值低于檢測范圍內(nèi)得31.25 pg/mL

  1. 測定特異性

本試劑盒識別天然和重組小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子。下述因子進(jìn)行了特異性的評估,沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)和干擾影響。

Recombinant human:

Recombinant Mouse:

CNTF

β-NGF

β-NGF

NGF R

NGF R

NT-4

NT-3

TrkB

NT-4

TrkC

TrkA

 

TrkB

 

 

檢測簡圖

 

疑問解答

問題

造成原因

解決方法

標(biāo)曲不好

移液量不準(zhǔn)確

檢查移液器,按時(shí)校準(zhǔn),仔細(xì)操作,充分混勻時(shí)蓋緊管口并盡量避免泡沫。

稀釋方法不恰當(dāng)

顯色值偏低

孵育時(shí)間太短

給予足夠的孵育時(shí)間,樣本和溶解的標(biāo)準(zhǔn)品隔夜后更換。

移液量不足或稀釋不當(dāng)

校準(zhǔn)移液器和規(guī)范操作

CV偏高

酶標(biāo)板清洗不當(dāng)

使用正確的洗滌工序;如果使用洗板機(jī),檢查所有的端口是否堵塞。

受污染的洗液

準(zhǔn)備新鮮洗液

靈敏度較低

試劑盒儲存不當(dāng)

按照產(chǎn)品組分表進(jìn)行保存。

 

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