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PBCV DNA ligase (25 U/μL)

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詳細介紹

產品簡介

PBCV DNA Ligase,亦稱為SplintR連接酶、PBCV-1 DNA LigaseChorella病毒DNA連接酶是一種ATP依賴的DNA連接酶能夠高效催化與一條互補的RNA單鏈配對的兩條相鄰DNA單鏈的連接反應。這兩條相鄰的DNA鏈中,提供3'羥基的被稱之為受體DNA鏈(Acceptor DNA),提供5'磷酸的被稱之為供體DNA鏈(Donor DNA),在這個連接過程中需要一條互補的RNA鏈對兩條DNA單鏈起“夾板”或“支架”的作用。PBCV DNA ligase的連接酶活性遠優于傳統的 T4 DNA 連接酶,對以 RNA 為夾板的 DNA 底物(表觀 Km = 1 nM,Km值越小表示親和力越強)表現出親和力,能夠對復雜混合物中獨特的 RNA 種類進行亞納摩爾級檢測,使其應用到高靈敏RNA 檢測技術,非常適合用于許多二代測序和分子診斷等應用中的靶標富集流程。

 

產品信息

貨號

14962ES80 / 14962ES90

規格

1,250 U / 5,000 U

來源

E.coli 表達的來源于Chorella virus PBCV-1 DNA Ligase基因

分子量

34 KD

酶活定義

一個單位定義為在2515 min內,于1X PBCV Ligase buffer中,將2 pmolFAM標記的DNA:RNA雜合底物連接所需的酶量(至少達到50%的完成度)

酶保存液

10 mM Tris-HCl , 300 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol pH 7.4 @ 25℃

反應條件

50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM ATP, 10 mM DTT, pH7.5 @25℃

濃度

25 U/µL

純度

>95% (SDS PAGE)

失活條件

65℃,20 min

 

組分信息

組分編號

組分名稱

14962ES80

14962ES90

14962-A

PBCV DNA ligase (25 U/µL)

50 µL

200 µL

14962-B

10 x PBCV Ligase buffer

1 mL

1 mL

 

產品應用

1.基于探針法的microRNA等小RNA的檢測;

2.通過互補RNA序列進行“夾板”固定的單鏈DNA的連接;

3.使用DNA探針進行連接達到檢測特定RNA的目的;

4.SNP或可變剪接的檢測;

5.RASL-seq分析。

 

儲存條件 

-25~-15℃保存,有效期2年。

 

使用說明

推薦配置應用反應與體系:

組分

體積

10 x PBCV Ligase buffer

2 µL

底物(Substrate)(1 µM)

2 µL

PBCV DNA ligase (25 U/µL)

1 µL

H2O

15 µL

Total

20 µL

25°C反應15-60 min ; 65°C失活20 min

 

注意事項

1.本品在ATP濃度(10 µM - 1 mM)和pH(6.5 - 9)范圍內都具有活性。在 Mg2+ > 5 mM,pH 值位于 7.5 至 8.0 的條件下,可觀察到最佳活性。較高溫度(高達37℃)和補充5 mM Mn2+ 可以增強該酶活性。鹽濃度超過100 mM會抑制反應。

2.為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

3.本產品僅作科研用途

 

Ver.CN20240513

 

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