產品信息 

產品名稱	產品編號	規格
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒	40754ES60	100T

 

產品描述

細胞衰老（Cell senescence）是細胞控制其生長潛能的保障機制，一般含義是復制衰老（Replicative senescence，RS），指正常細胞經過有限次數的分裂后，停止分裂，此時細胞雖然是存活的，但是細胞形態和生理代謝活性發生明顯變化的現象。體外衰老細胞研究常用的生物學特征包括：1）不可逆的生長停滯；2）與衰老相關的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA-β-gal）的活化。作為溶酶體內的水解酶，通常在pH 4.0的條件下表現活性，但是衰老細胞內其在pH 6.0的條件下表現活性，且隨著傳代次數的增加，細胞群體中表現衰老相關的β-半乳糖苷酶的細胞數目逐漸增加。

本試劑盒正是基于SA -β-gal活性變化的生物學特征而設計的，以X-Gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下生成深藍色產物，從而在光學顯微鏡下觀察顏色變化以分析細胞的衰老狀況。

本試劑盒可以培養細胞的衰老檢測，也可以用于組織切片的衰老檢測。產品性能穩定，參數經優化，著色敏感，特異性高。僅對衰老細胞進行染色，不會染色衰老前的細胞（presenescent cells）、靜止期細胞（quiescent cells）、永生細胞（immortal cells）或腫瘤細胞。

 

產品組分

組分編號	組分名稱	規格
40754-A	β-半乳糖苷酶染色液A	1.5 mL
40754-B	β-半乳糖苷酶染色液B	1.5 mL
40754-C	β-半乳糖苷酶染色液C	100 mL
40754-D	β-半乳糖苷酶染色固定液	100 mL
40754-E	X-Gal溶液	5 mL

 

運輸與保存方法

冰袋運輸。-20℃保存，一年有效，其中X-Gal溶液需避光保存。

 

注意事項

1、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2、本試劑盒β-半乳糖苷酶染色固定液存在一定的腐蝕性和毒性，操作時請注意小心防護。

3、細胞衰老β-半乳糖苷酶染色反應依賴于特定的pH值，不能用于細胞培養的CO₂培養箱中進行染色反應。因為CO₂培養箱中較高濃度的CO₂會影響染色工作液的pH值，導致染色失敗。

4、40754-B剛溶解后會觀察到有沉淀，屬正常現象，充分混勻或者漩渦震蕩可促使沉淀全部溶解，之后才能用于染色實驗。配置染色工作液時，也可能有少量絮狀沉淀出現，震蕩混勻后就會完全溶解。在染色前一定要確保所有的試劑處于完全溶解狀態。

5. X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的細胞樣品可以在4ºC冰箱避光保存。

6、本產品僅作科研用途！

 

使用方法

1. 實驗前的準備工作：

1.1、染色工作液配制

實驗開始前，將試劑盒內各組分從冰箱內取出，徹底溶解。其中X-Gal溶液最好置入冰槽里等待溶化。根據表1進行染色工作液的配置，實驗體系類型，檢測樣本數，統一配制單次實驗需要的染色工作液總量。

表1 染色工作液配方表

β-半乳糖苷酶染色液A	10 μL
β-半乳糖苷酶染色液B	10 μL
β-半乳糖苷酶染色液C	940 μL
X-Gal溶液	40 μL

【注】配制染色工作液時需使用聚丙烯（polypropylene）容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯（polystyrene）容器，對于二者的判定：聚丙烯容器可高壓滅菌，而聚苯乙烯容器則不可高壓滅菌，一旦高溫高壓處理就會嚴重變形。但是染色過程可以在聚苯乙烯容器內進行，如細胞培養常用的6孔板。

【注】為減少樣本染色過程中出現結晶現象，建議X-Gal使用前可適當37℃加熱1-3 h；染色工作液需要現配現用，并盡量在15 min內用完。

2. 6孔細胞培養板染色（貼壁細胞）：

2.1、吸除細胞培養液，用PBS/HBSS洗滌細胞1次，加入1 mL β-半乳糖苷酶染色固定液。室溫固定10~15 min。

【注】對于其它類型的培養板，固定液及后續溶液的用量參照此比例進行操作。

2.2、吸除固定液，用PBS/HBSS洗滌細胞3次，每次3 min。

2.3、吸除PBS/HBSS，每孔加入1 mL預熱的染色工作液，覆蓋整個生長表面。

2.4、37℃孵育過夜，可以用封口膜或保鮮膜封住6孔板防止液體蒸發。

【注】37℃孵育不能在CO₂培養箱中進行，因其內高濃度的CO₂會影響染色工作液的pH值，導致染色失敗。

2.5、普通光學顯微鏡下觀察和計數：表達SA β-gal的細胞為陽性細胞，呈現藍色。如不能及時觀察計數，可以去除染色工作液，加入2 mL PBS緩沖液，4℃可以保存數天，或者加入封片劑封片后，4℃可保存較長時間。

3. 懸浮細胞染色：

3.1、收集細胞，2500×g離心10 min收集細胞至1.5 mL離心管內，用PBS/HBSS洗滌1次，加入1 mLβ-半乳糖苷酶染色固定液。室溫固定15 min。固定時可以在搖床上緩慢搖動，以避免細胞結成團塊。

3.2、2500×g離心10 min，吸除細胞固定液，用PBS/HBSS洗滌細胞3次，每次3 min。

3.3、2500×g離心10 min，吸除PBS/HBSS，每管加入0.5-1 mL預熱的染色工作液。染色工作液的配制方法參見表1，具體染色工作液總量請根據樣本類型、樣本數等進行計算。

3.4、37℃孵育過夜。

【注】37℃孵育不能在CO₂培養箱中進行，因其內高濃度的CO₂會影響染色工作液的pH值，導致染色失敗。

3.5、取部分染色好的細胞，滴加到載玻片上或6孔板內，普通光學顯微鏡下觀察和計數。如不能及時觀察計數，可以離心，去除染色工作液，加入1 mL PBS緩沖液，4℃可以保存數天。也可取細胞用于涂片，加上封片劑封片后，4℃可保存較長時間。

4. 冰凍切片染色：

4.1、冰凍切片先進行復溫，用PBS浸泡洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。

4.2、加入適當體積的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于15 min。

4.3、用PBS浸泡洗滌組織3次，每次不少于5 min。

4.4、吸除PBS，加入適當量的預熱的染色工作液。染色工作液的配制方法參見表1。

4.5、37℃孵育過夜，可以用封口膜或保鮮膜封住防止蒸發，最好把整個切片浸泡在染色工作液中。

【注】37℃孵育不能在CO₂培養箱中進行，因其內高濃度的CO₂會影響染色工作液的pH值，導致染色失敗。

4.6、普通光學顯微鏡下觀察和計數。如不能及時觀察計數，加上封片劑封片后4℃可保存較長時間。

 

HB240606