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基因克隆的基本步驟有哪些

lt061202 2015-12-21 10:05:32 752  瀏覽
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全部評論(1條)

  • xiaofeitiandg 2015-12-22 00:00:00
      選擇目的基因,并設計相應引物;   用引物PCR擴增目的基因片段;   選擇合適(抗性標記、酶切位點等)的克隆載體(為了保真擴增),并將PCR片段連接入克隆載體中;(一般用Taq酶的PCR產物在末尾會自帶一個A,可在Solution 1作用下與兩端各帶一個T的線性T載體直接相連)   將連接產物轉化入感受態大腸桿菌,使之在含有抗生素的培養基上生長擴增;   從大腸桿菌中提取質粒(即前面的連接產物),酶切鑒定和測序鑒定均無誤后將目的基因片段切下并與新的表達載體連接,然后再次轉化入大腸桿菌中擴增,再提質粒,即得到想要的目的基因片段克隆.

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