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請(qǐng)教高手:克隆基因的步驟

探獨(dú)峽嗚 2017-02-23 09:10:10 383  瀏覽
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參與評(píng)論

全部評(píng)論(1條)

  • 厄爾多思2 2017-02-24 00:00:00
    選擇目的基因,并設(shè)計(jì)相應(yīng)引物; 用引物PCR擴(kuò)增目的基因片段; 選擇合適(抗性標(biāo)記、酶切位點(diǎn)等)的克隆載體(為了保真擴(kuò)增),并將PCR片段連接入克隆載體中;(一般用Taq酶的PCR產(chǎn)物在末尾會(huì)自帶一個(gè)A,可在Solution 1作用下與兩端各帶一個(gè)T的線性T載體直接相連) 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入感受態(tài)大腸桿菌,使之在含有抗生素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)擴(kuò)增; 從大腸桿菌中提取質(zhì)粒(即前面的連接產(chǎn)物),酶切鑒定和測(cè)序鑒定均無(wú)誤后將目的基因片段切下并與新的表達(dá)載體連接,然后再次轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中擴(kuò)增,再提質(zhì)粒,即得到想要的目的基因片段克隆.

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